Załącznik IX

Zakres stosowania

Niniejszy załącznik ma zastosowanie do wyrobów przeznaczonych do wykrywania lub oznaczania markerów zakażenia ludzkim wirusem cytomegalii (CMV).

Tabela 1 dotyczy testów pierwszego rzutu na obecność łącznych przeciwciał przeciwko CMV (łączne anty-CMV) i przeciwciał IgG przeciwko CMV (anty-CMV IgG).

Tabela 2 dotyczy wyrobów do jakościowych i ilościowych testów NAT do oznaczania CMV DNA.

Tabela 1. Testy pierwszego rzutu: łączne anty-CMV i anty-CMV IgG

Charakterystyka działania

Próbki

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość diagnostyczna

Próbki dodatnie

≥ 400

w tym próbki z niedawnego i przebytego zakażenia CMV,

dodatnie próbki o niskim i wysokim mianie

≥ 99 % czułość w przypadku możliwego do potwierdzenia zakażenia w przeszłości (1);

ogólna czułość, z uwzględnieniem niedawnego zakażenia (2), jest co najmniej równoważna ogólnej czułości wyrobu porównawczego

Panele serokonwersji

Do testowania, jeżeli dostępne

Czułość diagnostyczna podczas serokonwersji jest zgodna z aktualnym stanem wiedzy

Czułość analityczna

Normy

Międzynarodowy standard WHO dla anty-CMV IgG (kod PEI 136616/17)

W przypadku oznaczania miana i zestawień ilościowych

Swoistość diagnostyczna

Próbki ujemne

≥ 400 (3) ujemnych próbek CMV od niewyselekcjonowanych dawców, w porównaniu z innym testem CMV

≥ 99 %

Pacjenci hospitalizowani (4)

≥ 200

Określa się potencjalne ograniczenia swoistości, jeśli istnieją.

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo (5)

≥ 100 łącznie

(np. RF+, wirusy pokrewne lub inne czynniki zakaźne, kobiety w ciąży itd.)

Tabela 2. Wyroby do jakościowych i ilościowych testów NAT do oznaczania CMV DNA

1. Dla wyrobów do amplifikacji określonej sekwencji kontrola funkcjonalności każdej próbki (kontrola wewnętrzna) jest przeprowadzana zgodnie z aktualnym stanem wiedzy. Kontrola ta stosowana jest w największym możliwym zakresie w czasie trwania całego procesu, tj. ekstrakcji, amplifikacji/hybrydyzacji, detekcji.

2. Określenie genotypu lub podtypu jest wykazywane przez właściwe zwalidowanie konstrukcji startera lub sondy i również jest walidowane przez testowanie próbek o znanych genotypach.

3. Potencjalna reaktywność krzyżowa niediagnozowanych sekwencji kwasów nukleinowych jest analizowana przez właściwe zwalidowanie konstrukcji startera lub sondy i również jest walidowana przez testowanie wybranych próbek.

4. Wyniki stosowania wyrobów do ilościowych testów NAT są spójne z międzynarodowymi wzorcami lub skalibrowanymi materiałami porównawczymi, jeśli dostępne, i są wyrażone w międzynarodowych jednostkach używanych w danym obszarze zastosowania.

Charakterystyka działania

Próbki

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość analityczna

Pierwszy Standard Międzynarodowy WHO dla ludzkiego CMV DNA (09/162; 5 000 000 IU/fiolka) (lub skalibrowane materiały porównawcze)

Czułość NAT i granicę wykrywalności NAT zatwierdza się seriami rozcieńczenia materiałów porównawczych, badając powtórzenia (minimum 24) przy różnych stężeniach analitu, w tym tych z przejściem od wyników dodatnich do ujemnych przy odpowiednim teście NAT.

Granica wykrywalności wyrażana jest przez 95-procentową wartość odcięcia dla wyników dodatnich (IU/ml) po analizie statystycznej (np. Probit) (6).

Testy ilościowe NAT: definicja dolnej i górnej granicy oznaczania, precyzja, dokładność,

„liniowy” zakres pomiaru, „zakres dynamiczny”.

Odtwarzalność dla różnych poziomów stężeń

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Czułość diagnostyczna

Czułość szczepu CMV

Próbki od pacjentów, w przypadku których za pomocą wyrobu porównawczego stwierdzono dodatni wynik badania CMV DNA

Serie rozcieńczenia kultur komórkowych dodatnich w kierunku CMV mogą służyć jako potencjalne substytuty

Testy jakościowe NAT: ≥ 100

Testy ilościowe NAT: ≥ 100

Serie rozcieńczenia w celu wykazania skuteczności oznaczania

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Swoistość diagnostyczna

Próbki pobrane od dawców krwi

Testy jakościowe NAT: ≥ 500

Testy ilościowe NAT: ≥ 100

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥ 20 próbek łącznie

W tym pochodzące od ludzi próbki dodatnie w kierunku pokrewnych ludzkich herpeswirusów, np. EBV, HHV6, VZV

Kultury komórkowe dodatnie w kierunku herpeswirusa mogą służyć jako potencjalne substytuty

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Przeniesienie

Silnie dodatnie CMV DNA;

ujemne CMV DNA

W czasie badań odporności na czynniki zewnętrzne należy wykonać co najmniej pięć testów z na przemian silnie dodatnimi i ujemnymi próbkami. Miana wirusa w silnie dodatnich próbkach są reprezentatywne dla występujących naturalnie wysokich mian wirusów.

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Wskaźnik awaryjności całego systemu

Słabo dodatnie CMV DNA

Badaniu poddaje się ≥ 100 próbek słabo dodatnich na obecność CMV DNA. W tych próbkach występuje stężenie wirusa równe 3 × 95 % wartości odcięcia dla dodatniego stężenia wirusa.

≥ 99 % dodatnie

(1) W tym badanie innych parametrów CMV (np. CMV-IgM, awidność, immunoblot) lub wcześniejszych/kolejnych próbek w celu określenia prawdziwego statusu próbki.

(2) Dodatkowe badania w celu potwierdzenia niedawnego zakażenia CMV (pierwotnego lub ponownego zakażenia): np. CMV-IgM, awidność IgG, analiza immunoblotów.

(3) Odpowiada to początkowej liczbie 1 000 dawców przy założeniu, że częstość występowania CMV wynosi 60 %.

(4) W tym biorcy przed przeszczepem.

(5) W tym z pokrewnymi herpeswirusami β (HHV-6, HHV-7).

(6) Podstawa: Farmakopea Europejska 9.0, 2.6.21 Techniki amplifikacji kwasu nukleinowego, Walidacja.