Załącznik IV

Zakres stosowania

Niniejszy załącznik ma zastosowanie do wyrobów przeznaczonych do wykrywania lub oznaczania markerów zakażenia ludzkim wirusem limfotropowym komórek T (HTLV).

Tabela 1 dotyczy testów pierwszego rzutu na obecność przeciwciał przeciwko HTLV I lub II (anty-HTLV I/II), które nie są szybkimi testami.

Tabela 2 dotyczy testów pierwszego rzutu na obecność anty-HTLV I/II, które są szybkimi testami.

Tabela 3 dotyczy testów potwierdzenia anty-HTLV I/II.

Tabela 4 dotyczy wyrobów NAT do oznaczania HTLV I/II.

Tabela 1. Testy pierwszego rzutu: anty-HTLV I/II

Charakterystyka działania

Próbka

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość diagnostyczna

Próbki dodatnie

≥ 300 HTLV-I

≥ 100 HTLV-II

w tym 25 dodatnich świeżych (z tego samego dnia) próbek surowicy (≤ 1 dzień po pobraniu próbek)

Wszystkie prawdziwie dodatnie próbki są uznawane za dodatnie.

Panele serokonwersji

Do określenia, jeżeli dostępne

Czułość diagnostyczna podczas serokonwersji jest zgodna z aktualnym stanem wiedzy, w stosownych przypadkach.

Swoistość diagnostyczna

Niewyselekcjonowani dawcy krwi (w tym osoby oddające krew po raz pierwszy) (1)

≥ 5 000

≥ 99,5 %

Pacjenci hospitalizowani

≥ 200

Określa się potencjalne ograniczenia swoistości, jeśli istnieją.

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥ 100 łącznie

(np. RF+, z pokrewnych infekcji wirusowych, od kobiet w ciąży)

Tabela 2. Szybkie testy: anty-HTLV I/II

Charakterystyka działania

Próbka

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość diagnostyczna

Próbki dodatnie

≥ 300 HTLV-I

≥ 100 HTLV-II

Wszystkie prawdziwie dodatnie próbki są uznawane za dodatnie.

Panele serokonwersji

Do określenia, jeżeli dostępne

Czułość diagnostyczna podczas serokonwersji jest zgodna z aktualnym stanem wiedzy, w stosownych przypadkach.

Swoistość diagnostyczna

Niewyselekcjonowani dawcy krwi (w tym osoby oddające krew po raz pierwszy)

≥ 1 000

≥ 99 %

Pacjenci hospitalizowani

≥ 200

Określa się potencjalne ograniczenia swoistości, jeśli istnieją.

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥ 200 próbek od kobiet w ciąży

≥ 100 łącznie innych próbek potencjalnie reagujących krzyżowo (np. RF+, z pokrewnych infekcji)

Tabela 3. Testy potwierdzenia: anty-HTLV I/II

Charakterystyka działania

Próbka

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość diagnostyczna

Próbki dodatnie

≥ 200 HTLV I

≥ 100 HTLV II

Identyfikacja jako „potwierdzone dodatnie” lub „wątpliwe”, nie jako „ujemne”

Panele serokonwersji

Do określenia, jeżeli dostępne

Czułość diagnostyczna podczas serokonwersji jest zgodna z aktualnym stanem wiedzy, w stosownych przypadkach.

Swoistość diagnostyczna

Dawcy krwi

≥ 200

Brak wyników fałszywie dodatnich

Pacjenci hospitalizowani

≥ 200

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥ 50 łącznie (w tym próbki od kobiet w ciąży, próbki z wynikami wątpliwymi w pozostałych testach potwierdzenia)

Tabela 4. Wyroby NAT do oznaczania HTLV I/II

1. Dla wyrobów do amplifikacji określonej sekwencji kontrola funkcjonalności każdej próbki (kontrola wewnętrzna) jest przeprowadzana zgodnie z aktualnym stanem wiedzy. Kontrola ta stosowana jest w największym możliwym zakresie w czasie trwania całego procesu, tj. ekstrakcji, amplifikacji/hybrydyzacji, detekcji.

2. Określenie genotypu lub podtypu jest wykazywane przez właściwe zwalidowanie konstrukcji startera lub sondy i również jest walidowane przez testowanie próbek o znanych genotypach.

3. Potencjalna reaktywność krzyżowa niediagnozowanych sekwencji kwasów nukleinowych jest analizowana przez właściwe zwalidowanie konstrukcji startera lub sondy i również jest walidowana przez testowanie wybranych próbek.

4. Wyniki stosowania wyrobów do ilościowych testów NAT są spójne z międzynarodowymi wzorcami lub skalibrowanymi materiałami porównawczymi, jeśli dostępne, i są wyrażone w międzynarodowych jednostkach używanych w danym obszarze zastosowania.

Charakterystyka działania

Próbka

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość analityczna

Międzynarodowe preparaty porównawcze

Czułość NAT i granicę wykrywalności NAT zatwierdza się seriami rozcieńczenia materiałów porównawczych, badając powtórzenia (minimum 24) przy różnych stężeniach analitu, w tym tych z przejściem od wyników dodatnich do ujemnych przy odpowiednim teście NAT.

Granica wykrywalności wyrażana jest przez 95-procentową wartość odcięcia dla wyników dodatnich (IU/ml) po analizie statystycznej (np. Probit) (2).

Testy ilościowe NAT: definicja dolnej i górnej granicy oznaczania, precyzja, dokładność,

„liniowy” zakres pomiaru, „zakres dynamiczny”.

Odtwarzalność dla różnych poziomów stężeń

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Czułość genotypu HTLV I i HTLV II

Wszystkie odpowiednie genotypy, najlepiej z międzynarodowych materiałów porównawczych

Potencjalne substytuty dla rzadkich genotypów HTLV (do oznaczenia na podstawie odpowiednich metod): hodowla komórkowa supernatantów; transkrypty in vitro; plazmidy

Testy jakościowe NAT: co najmniej 10 próbek/genotyp lub podtyp

Testy ilościowe NAT: Serie rozcieńczenia w celu wykazania skuteczności oznaczania

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Swoistość diagnostyczna

Próbki pobrane od dawców krwi

Testy jakościowe NAT: ≥ 500

Testy ilościowe NAT: ≥ 100

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥ 10 próbek dodatnich na obecność ludzkich retrowirusów (np. HIV-1, HIV-2)

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Przeniesienie

Silnie dodatnie HTLV RNA;

ujemne HTLV RNA

W czasie badań odporności na czynniki zewnętrzne należy wykonać co najmniej pięć testów z na przemian silnie dodatnimi i ujemnymi próbkami. Miana wirusa w silnie dodatnich próbkach są reprezentatywne dla występujących naturalnie wysokich mian wirusów.

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Wykrywanie w odniesieniu do statusu przeciwciał

Dodatnie HTLV-RNA: anty-HTLV ujemne, anty-HTLV dodatnie

Próbki pobrane przed serokonwersją (anty-HTLV ujemne) i po serokonwersji (anty-HTLV dodatnie)

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Wskaźnik awaryjności całego systemu

Słabo dodatnie HTLV RNA

Badaniu poddaje się ≥ 100 próbek słabo dodatnich na obecność HTLV RNA. W tych próbkach występuje stężenie wirusa równe 3 × 95 % wartości odcięcia dla dodatniego stężenia wirusa.

≥ 99 % dodatnie

(1) Badane są populacje dawców krwi z co najmniej dwóch ośrodków krwiodawstwa i składają się one z kolejnych pobrań krwi, które nie zostały wybrane w celu wyłączenia dawców oddających krew po raz pierwszy.

(2) Podstawa: Farmakopea Europejska 9.0, 2.6.21 Techniki amplifikacji kwasu nukleinowego, Walidacja.