Załącznik XII

Zakres stosowania

Niniejszy załącznik ma zastosowanie do wyrobów przeznaczonych do wykrywania lub oznaczania markerów zakażenia Trypanosoma cruzi (T. cruzi).

Tabela 1 dotyczy testów pierwszego rzutu na obecność przeciwciał przeciwko T. cruzi (anty-T. cruzi).

Tabela 2 dotyczy testów potwierdzenia i testów uzupełniających anty-T. cruzi.

Tabela 3 dotyczy wyrobów do jakościowych i ilościowych testów NAT do oznaczania DNA T. cruzi.

Tabela 1. Testy pierwszego rzutu: anty-T. cruzi

Charakterystyka działania

Próbki

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość diagnostyczna

Próbki dodatnie

≥ 400 próbek dodatnich, w tym wysoce dodatnich potwierdzonych w wyniku co najmniej dwóch różnych testów serologicznych dla różnych przeciwciał przeciwko T.cruzi

Spośród tych 400 próbek ≥ 25 było dodatnich na pasożyty, co zostało potwierdzone metodą bezpośredniego wykrywania.

≥ 99,5 % ogólnej czułości

Panele serokonwersji

Do określenia, jeżeli dostępne

Czułość diagnostyczna podczas serokonwersji jest zgodna z aktualnym stanem wiedzy

Czułość analityczna

Normy

Międzynarodowe standardy WHO

Kod NIBSC: 09/186

Kod NIBSC: 09/188

Swoistość diagnostyczna

Dawcy niewyselekcjonowani (w tym osoby oddające krew po raz pierwszy) (1)

≥ 5 000

≥ 99,5 %

Pacjenci hospitalizowani

≥ 200

Określa się potencjalne ograniczenia swoistości, jeśli istnieją.

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥ 100 łącznie

w tym następujące próbki: dodatnie na obecność przeciwciał Toxoplasma gondii; co najmniej 5 próbek dodatnich na obecność przeciwciał Leishmania; RF+; związane z nimi czynniki mikrobiologiczne lub inne czynniki zakaźne; pacjenci z SLE; pacjenci z dodatnimi przeciwciałami antyfosfolipidowymi; kobiety w ciąży itp.

Tabela 2. Testy potwierdzenia i testy uzupełniające: anty-T. cruzi

Charakterystyka działania

Próbki

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria akceptacji

Czułość diagnostyczna

Próbki dodatnie

≥ 300 próbek dodatnich, w tym wysoce dodatnich potwierdzonych w wyniku co najmniej dwóch różnych testów serologicznych dla różnych przeciwciał przeciwko T.cruzi

Spośród tych 300 próbek ≥ 25 było dodatnich na pasożyty, co zostało potwierdzone metodą bezpośredniego wykrywania.

W ≥ 99 % identyfikacja jako „potwierdzone dodatnie” lub „wątpliwe”

Panele serokonwersji

Jeżeli dostępne

Czułość diagnostyczna podczas serokonwersji jest zgodna z aktualnym stanem wiedzy, w stosownych przypadkach.

Czułość analityczna

Normy

Międzynarodowe standardy WHO

Kod NIBSC: 09/186

Kod NIBSC: 09/188

Czułość diagnostyczna

Próbki ujemne

≥ 200

≥ 99 %

Próbki kliniczne

≥ 200

Określa się potencjalne ograniczenia swoistości, jeśli istnieją.

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥ 50 łącznie, w tym próbki od kobiet w ciąży, próbki z wynikami wątpliwymi w pozostałych testach potwierdzenia

Tabela 3: Wyroby NAT do oznaczania DNA T. cruzi

1. Dla wyrobów do amplifikacji określonej sekwencji kontrola funkcjonalności każdej próbki (kontrola wewnętrzna) jest przeprowadzana zgodnie z aktualnym stanem wiedzy. Kontrola ta stosowana jest w największym możliwym zakresie w czasie trwania całego procesu, tj. ekstrakcji, amplifikacji/hybrydyzacji, detekcji.

2. Określenie genotypu lub podtypu jest wykazywane przez właściwe zwalidowanie konstrukcji startera lub sondy i również jest walidowane przez testowanie próbek o znanych genotypach.

3. Potencjalna reaktywność krzyżowa niediagnozowanych sekwencji kwasów nukleinowych jest analizowana przez właściwe zwalidowanie konstrukcji startera lub sondy i również jest walidowana przez testowanie wybranych próbek.

4. Wyniki stosowania wyrobów do ilościowych testów NAT są spójne z międzynarodowymi wzorcami lub skalibrowanymi materiałami porównawczymi, jeśli dostępne, i są wyrażone w międzynarodowych jednostkach używanych w danym obszarze zastosowania.

Charakterystyka działania

Próbki

Liczba, cechy, zastosowanie próbek

Kryteria dopuszczalności

Czułość analityczna

Opisany własny preparat porównawczy (jeżeli nie są dostępne międzynarodowe materiały porównawcze)

Czułość NAT i granicę wykrywalności NAT zatwierdza się seriami rozcieńczenia materiałów porównawczych, badając powtórzenia (minimum 24) przy różnych stężeniach analitu, w tym tych z przejściem od wyników dodatnich do ujemnych przy odpowiednim teście NAT.

Granica wykrywalności wyrażana jest przez 95-procentową wartość odcięcia dla wyników dodatnich (IU/ml) po analizie statystycznej (np. Probit) (2).

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Czułość diagnostyczna: różne szczepy/izolaty T.cruzi

Próbki od pacjentów z różnych regionów, w przypadku których za pomocą wyrobu porównawczego stwierdzono dodatni wynik badania DNA T.cruzi; warianty sekwencji

≥ 100

Serie rozcieńczenia kultur komórkowych (izolatów) dodatnich w kierunku T.cruzi lub materiałów z modeli zwierzęcych dodatnich w kierunku T.cruzi mogą służyć jako potencjalne substytuty

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Swoistość diagnostyczna

Próbki ujemne

≥ 100

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Reaktywność krzyżowa

Próbki potencjalnie reagujące krzyżowo

≥10 pochodzących od ludzi próbek dodatnich w kierunku innych pasożytów, np. gatunku Plasmodium, Trypanosoma brucei. Dodatnie kultury komórkowe mogą służyć jako potencjalne substytuty

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Przeniesienie

W czasie badań odporności na czynniki zewnętrzne należy wykonać co najmniej pięć testów z na przemian silnie dodatnimi i ujemnymi próbkami. Miana T.cruzi w silnie dodatnich próbkach są reprezentatywne dla występujących naturalnie wysokich mian T.cruzi.

Zgodne z aktualnym stanem wiedzy

Wskaźnik awaryjności całego systemu

Badaniu poddaje się ≥ 100 próbek słabo dodatnich na obecność DNA T.cruzi. Te próbki, w których występuje stężenie T.cruzi równe 3 × 95 % wartości odcięcia dla dodatniego stężenia T.cruzi.

≥ 99 % dodatnie

(1) Badane są populacje dawców krwi z co najmniej dwóch ośrodków krwiodawstwa i składają się one z kolejnych pobrań krwi, które nie zostały wybrane w celu wyłączenia dawców oddających krew po raz pierwszy.

(2) Podstawa: Farmakopea Europejska 9.0, 2.6.21 Techniki amplifikacji kwasu nukleinowego, Walidacja.